细胞仪的专业知识

1.关于细胞方面的所有知识

细胞的定义 细胞是由膜包围着含有细胞核(或拟核)的原生质所组成, 是生物体的结构和功能的基本单位, 也是生命活动的基本单位。

细胞能够通过分裂而增殖,是生物体个体发育和系统发育的基础。细胞或是独立的作为生命单位, 或是多个细胞组成细胞群体或组织、或器官和机体;细胞还能够进行分裂和繁殖;细胞是遗传的基本单位,并具有遗传的全能性。

细胞定义的新思考 除病毒外的所有生物,都由细胞构成。自然界中既有单细胞生物,也有多细胞生物。

细胞是生物体基本的结构和功能单位。细胞是生物界中,不可缺的一部分。

细胞是生命的基本单位,细胞的特殊性决定了个体的特殊性,因此,对细胞的深入研究是揭开生命奥秘、改造生命和征服疾病的关键。细胞生物学已经成为当代生物科学中发展最快的一门尖端学科,是生物、农学、医学、畜牧、水产和许多生物相关专业的一门必修课程。

50年代以来诺贝尔生理与医学奖大都授予了从事细胞生物学研究的科学家。 定义概要 细胞:是生命活动的基本单位,一切有机体都由细胞构成,细胞是构成有机体的基本单位。

★细胞具有独立的、有序的自控代谢体系,是代谢与功能的基本单位 ★细胞是有机体生长与发育的基础 ★细胞是遗传的基本结构单位,细胞具有遗传的全能性 ★没有细胞就没有完整的生命 细胞的基本共性 1、所有的细胞表面均有由磷脂双分子层与镶嵌蛋白质构成的生物膜,即细胞膜。 2、所有的细胞都含有两种核酸:即DNA与RNA。

3、作为遗传信息复制与转录的载体。 4、作为蛋白质合成的机器─核糖体,毫无例外地。

5、存在于一切细胞内。 6、所有细胞的增殖都以一分为二的方式进行分裂。

细胞的基本结构 在光学显微镜下观察植物的细胞,可以看到它的结构分为下列四个部分 1.细胞壁 位于植物细胞的最外层,是一层透明的薄壁。它主要是由纤维素组成的,孔隙较大,物质分子可以自由透过。

细胞壁对细胞起着支持和保护的作用。 2.细胞膜 细胞壁的内侧紧贴着一层极薄的膜,叫做细胞膜。

这层由蛋白质分子和脂类分子组成的薄膜,水和氧气等小分子物质能够自由通过,而某些离子和大分子物质则不能自由通过,因此,它除了起着保护细胞内部的作用以外,还具有控制物质进出细胞的作用:既不让有用物质任意地渗出细胞,也不让有害物质轻易地进入细胞。 细胞膜在光学显微镜下不易分辨。

用电子显微镜观察,可以知道细胞膜主要由蛋白质分子和脂类分子构成。在细胞膜的中间,是磷脂双分子层,这是细胞膜的基本骨架。

在磷脂双分子层的外侧和内侧,有许多球形的蛋白质分子,它们以不同深度镶嵌在磷脂分子层中,或者覆盖在磷脂分子层的表面。这些磷脂分子和蛋白质分子大都是可以流动的,可以说,细胞膜具有一定的流动性。

细胞膜的这种结构特点,对于它完成各种生理功能是非常重要的。 3.细胞质 细胞膜包着的黏稠透明的物质,叫做细胞质。

在细胞质中还可看到一些带折光性的颗粒,这些颗粒多数具有一定的结构和功能,类似生物体的各种器官,因此叫做细胞器。例如,在绿色植物的叶肉细胞中,能看到许多绿色的颗粒,这就是一种细胞器,叫做叶绿体。

绿色植物的光合作用就是在叶绿体中进行的。在细胞质中,往往还能看到一个或几个液泡,其中充满着液体,叫做细胞液。

在成熟的植物细胞中,液泡合并为一个中央液泡,其体积占去整个细胞的大半。 细胞质不是凝固静止的,而是缓缓地运动着的。

在只具有一个中央液泡的细胞内,细胞质往往围绕液泡循环流动,这样便促进了细胞内物质的转运,也加强了细胞器之间的相互联系。细胞质运动是一种消耗能量的生命现象。

细胞的生命活动越旺盛,细胞质流动越快,反之,则越慢。细胞死亡后,其细胞质的流动也就停止了。

除叶绿体外,植物细胞中还有一些细胞器,它们具有不同的结构,执行着不同的功能,共同完成细胞的生命活动。这些细胞器的结构需用电子显微镜观察。

在电镜下观察到的细胞结构称为亚显微结构。 ①线粒体 呈线状、粒状,故名。

在线粒体上,有很多种与呼吸作用有关的颗粒,即多种呼吸酶。它是细胞进行呼吸作用的场所,通过呼吸作用,将有机物氧化分解,并释放能量,供细胞的生命活动所需,所以有人称线粒体为细胞的“发电站”或“动力工厂”。

②叶绿体 叶绿体是绿色植物细胞中重要的细胞器,其主要功能是进行光合作用。叶绿体由双层膜、类囊体和基质三部分构成。

类囊体是一种扁平的小囊状结构,在类囊体薄膜上,有进行光合作用必需的色素和酶。许多类囊体叠合而成基粒。

基粒之间充满着基质,其中含有与光合作用有关的酶。基质中还含有DNA。

③内质网 内质网是细胞质中由膜构成的网状管道系统广泛的分布在细胞质基质内。它与细胞膜相通连,对细胞内蛋白质等物质的合成和运输起着重要作用。

内质网有两种:一种是表面光滑的;另一种是上面附着许多小颗粒状的。内质网增大了细胞内的膜面积,膜上附着这许多酶,为细胞内各种化学反应的正常进行提供了有利条件。

④高尔基体 高尔基体普遍存在于植物细胞和动物细胞中。一般认为,细胞中的高尔基体与细胞。

2.流式细胞仪的基本工作原理是什么

按检测需要标记了特异性荧光染料的单细胞和鞘液,分别经硅化管进入流式室,形成鞘液包裹细胞悬液的稳态单细胞液柱。

该液柱以稳定的层流形式通过喷嘴高速射下,液柱与水平方向的高度聚焦的激光束垂直相交,单个细胞上标记的荧光染料在通过激光光斑时被激发而产生特异性荧光。同时,由于混合细胞群中细胞大小和胞内颗粒的多少会被激发而产生不同的散射光。

仪器有荧光检测系统和散射光感受系统,用于收集荧光信号和散射光信号。被接受的光电信号转换成电压脉冲和积分脉冲,使信号放大,该信号进入计算机系统进行数据转换、分析、处理。

3.有关细胞的知识

分裂后形成的新细胞称子细胞、淀粉等有机物和O2,血细胞:①光合作用以CO2,并且释放出能量的总过程、细胞质中,无论在光下、暗处随时都在进行、己糖等有机物以及O2;②光合作用的产物是己糖、蔗糖。有些细胞分化可能结束(细胞全能性低),但分裂则不会结束,最终生成二氧化碳或其他产物;④在光合过程中进行光合磷酸化反应,在呼吸过程中进行氧化磷酸化反应;⑤光合作用发生的部位是在绿色细胞的叶绿体中,只在光下才发生,而呼吸作用发生在所有生活细胞的线粒体,有丝分裂的过程中但是进行分化一定是在进行的。在单细胞生物中细胞分裂就是个体的繁殖,在多细胞生物中细胞分裂是个体生长。细胞分裂通常包括核分裂和胞质分裂两步。在核分裂过程中母细胞把遗传物质传给子细胞,当然就不可能进行分化,而造血干细胞则总是分裂分化产生各种白细胞,在可见光的照射下,将二氧化碳和水转化为葡萄糖,并释放出氧气的生化过程。

呼吸作用是生物体内的有机物在细胞内经过一系列的氧化分解、发育和繁殖的基础。细胞分裂是活细胞繁殖其种类的过程,而呼吸作用是把稳定化学能转化为活跃化学能,是释放能量的过程。通常包括核分裂和胞质分裂两步。在核分裂过程中母细胞把遗传物质传给子细胞,而呼吸作用的产物是CO2和H2O;③光合作用把光能依次转化为电能、活跃化学能和稳定化学能,是贮藏能量的过程?

分化是进行有丝分裂的多细胞生物体,具有使后代细胞逐渐朝着某一方向发展,并构建形成特定的组织或者细胞的能力。

换句话说,进行有丝分裂不一定在分化。在单细胞生物中细胞分裂就是个体的繁殖,在多细胞生物中细胞分裂是个体生长、H2O为原料,而呼吸作用的反应物为淀粉是细胞分化吧。

人的细胞如神经元成熟后是不进行分裂的,又叫生物氧化。

区别,。

分裂一个细胞分裂为两个细胞的过程。分裂前的细胞称母细胞、发育和繁殖的基础。

光合作用是植物、藻类和某些细菌利用叶绿素

4.细胞的知识

具有核被膜和各种细胞器的细胞,称为真核细胞。只有拟核、没有细胞器的细胞,称为原核细胞。

细胞的基本结构

(一)原核细胞

核区(类核体、拟核):染色体只由环状DNA组成,不含组蛋白。

细胞器:仅有核糖体,70S。

细胞壁:主要成分为含乙酰胞壁酸的肽聚糖。

(二)真核细胞

细胞膜、细胞质、细胞核。

1.质膜(细胞膜):生活细胞的外表,都有一层薄膜包围,将细胞与外界分开,这层薄膜称为细胞膜或质膜。细胞膜与细胞内的所有膜统称为生物膜,是一种半透性膜,对进出细胞的物质有很强的选择透性,其物质组成和基本结构相似。

5.流式细胞仪的原理和操作过程

原理:

流式细胞仪可同时进行多参数测量,信息主要来自特异性荧光信号及非荧光散射信号。测量是在测量区进行的,所谓测量区就是照射激光束和喷出喷孔的液流束垂直相交点。液流中央的单个细胞通过测量区时,受到激光照射会向立体角为2π的整个空间散射光线,散射光的波长和入射光的波长相同。散射光的强度及其空间分布与细胞的大小、形态、质膜和细胞内部结构密切相关,因为这些生物学参数又和细胞对光线的反射、折射等光学特性有关。未遭受任何损坏的细胞对光线都具有特征性的散射,因此可利用不同的散射光信号对不经染色活细胞进行分析和分选。经过固定的和染色处理的细胞由于光学性质的改变,其散射光信号当然不同于活细胞。散射光不仅与作为散射中心的细胞的参数相关,还跟散射角、及收集散射光线的立体角等非生物因素有关。

在流式细胞术测量中,常用的是两种散射方向的散射光测量:①前向角(即0角)散射(FSC);②侧向散射(SSC),又称90角散射。这时所说的角度指的是激光束照射方向与收集散射光信号的光电倍增管轴向方向之间大致所成的角度。一般说来,前向角散射光的强度与细胞的大小有关,对同种细胞群体随着细胞截面积的增大而增大;对球形活细胞经实验表明在小立体角范围内基本上和截面积大小成线性关系;对于形状复杂具有取向性的细胞则可能差异很大,尤其需要注意。侧向散射光的测量主要用来获取有关细胞内部精细结构的颗粒性质的有关信息。侧向散射光虽然也与细胞的形状和大小有关,但它对细胞膜、胞质、核膜的折射率更为敏感,也能对细胞质内较大颗粒给出灵敏反映。

在实际使用中,仪器首先要对光散射信号进行测量。当光散射分析与荧光探针联合使用时,可鉴别出样品中被染色和未被染色细胞。光散射测量最有效的用途是从非均一的群体中鉴别出某些亚群。

荧光信号主要包括两部分:①自发荧光,即不经荧光染色细胞内部的荧光分子经光照射后所发出的荧光;②特征荧光,即由细胞经染色结合上的荧光染料受光照而发出的荧光,其荧光强度较弱,波长也与照射激光不同。自发荧光信号为噪声信号,在多数情况下会干扰对特异荧光信号的分辨和测量。在免疫细胞化学等测量中,对于结合水平不高的荧光抗体来说,如何提高信噪比是个关键。一般说来,细胞成分中能够产生的自发荧光的分子(例核黄素、细胞色素等)的含量越高,自发荧光越强;培养细胞中死细胞/活细胞比例越高,自发荧光越强;细胞样品中所含亮细胞的比例越高,自发荧光越强。

减少自发荧光干扰、提高信噪比的主要措施是:①尽量选用较亮的荧光染料;②选用适宜的激光和滤片光学系统;③采用电子补偿电路,将自发荧光的本底贡献予以补偿。

操作过程:

①打开电源,对系统进行预热;

②打开气体阈,调节 压力,获得适宜的液流速度;开启光源冷却系统;

③在样品管中加入去离子水,冲洗液流的喷嘴系统;

④利用校准标准样品,调整仪器,使在激光功率、光电倍增管电压、放大器电路增益调定的 基础上,0和90散射的荧光强度最强,并要求变异系数为最小;

⑤选定流速、测量细胞数、测量参数等,在同样的工作条件下测量样品和对照样品;同时选 择计算机屏上数据的显示方式,从而能直观掌握测量进程;

⑥样品测量完毕后,再用去离子水冲洗液流系统;

⑦因为实验数据已存入计算机硬盘(有的机器还备有光盘系统,存贮量更大),因此可关闭 气体、测量装置,而单独使用计算机进行数据处理;

⑧将所需结果打印出来。

6.仪表专业知识

一、必须具备的基础知识

1 热学、力学、电学、光学、化工分析等方面的基础知识(高中以上);

2 有较高的数学知识,线性代数,拉氏变换和模糊数学等方面的基础知识;

3 有较高的自动化仪表专业的理论知识;

4 有化工工艺,化工原理的基础理论知识;

5 自动调节原理和化工自动化基本知识;

6 测量、误差的基本理论;

7 掌握化工仪表维护检修规程;

8 熟练掌握复杂仪表、高精度仪表、新型仪表、智能仪表的种类、名称、型号、构造、工作原理及正确的使用方法和维护保养的方法;

9 全面掌握化工单元的自动控制系统的工作过程;

10 掌握工艺生产的特点,工艺对仪表、自动控制提出要求;

11 全面熟练掌握各种复杂的标准计量器具和先进的校验设备及其附属设备、使用工具的名称、型号、性能、作用和正确使用方法与维护保养知识;

12 掌握计量仪表,自动化系统可那发生的事故性质、危害程度及预防方法;

13 数量掌握本工种所配备的各种安全设施和防护用品的性能及使用方法;

14 具有仪表技术管理的基本知识;

15 具有计量管理的全面知识;

16 具有初级焊工的工艺知识;

17 具有电工中级工的专业技术知识;

18 具有接受仪表、自动化专业范围内的新设备、新理论的基础知识。

二、必须要具备的专业技能

1 熟练掌握各种复杂的、高精度的、先进的仪表和调节器的维护和检修、试验调整和鉴定;

2 能对仪表及自动化系统进行施工准备和安装调试工作;

3 能根据智能仪表使用说明书的规定进行编程和检修;

4 能对集散控制系统进行大、中修作业;

5 能根据被调参数的记录曲线在线改变调节系统的各种参数,以提高系统的调节调节品质;

6 熟练处理整定智能仪表和集散控制系统的各中参数,能正确判断运行中发生的异常情况,并进行处理;

7 能解决各类仪表,自动化系统运行中的疑难问题,并提出改进意见;

8 根据生产红的问题,能提出解决仪表,自动化方面的技术方案;

9 能独立处理在线仪表的复杂情况;

10 熟练掌握各种复杂的标准计量器具和先进的校验设备的使用方法、性能、结构和维护检修方法;

11 掌握节流装置、调节阀的计算方法;

12 掌握流量测量的温度,压力的补偿计算;

13 掌握调节器参数的工程整定方法,并根据被调参数的记录曲线改善调节品质;

14 能进行电子电路元件的代换计算,小型变压器的计算和一般的稳压电路的设计;

15 能绘制仪表设备示意图,安装接线图;

16 能熟练的看懂仪表,自动化的施工图;

17 能看懂工艺管道、桥架、脉冲管线和电气线保护管设备的空视图。

7.流式细胞仪的原理是什么

最近一直在了解流式细胞术和流式分选的知识,看到这个问题想回答一下: 流式细胞仪是以流式细胞术为基础,快速精确的对单个细胞的理化性质进行定量分析和分选。

分析流程为:制备单细胞悬液,用特异性荧光染料标记的抗体进行染色,经染色后的待测细胞在一定气体压力下被压入流动室,在鞘液的包裹下细胞呈单行排列,依次通过检测区域,在激光束的照射下细胞会产生散射光和激发荧光。这两种信号会同时被光电倍增管( PMT) 接收。

接收后可转换为电信号,通过模/数转换器,将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号,进行分析。 如上所述,流式细胞仪是由液流系统、光路系统以及检测分析系统三部分组成,部分仪器还具有分选功能,能对粒子进行充电和偏转从而实现细胞分选。

液流系统:通过产生压力使含有目的细胞的样本快速进入仪器,在封闭的样品管中利用样品和鞘液之间的压力差是样本聚集到光学分析系统;光路系统:由不同的激光器发射出的激光照射到细胞表面产生光信号,而后经过不同的光路系统被接收。在流式照射室的分析点,激光照射到细胞表面发生散射和折射,并发射出散射光包括前向散射光(FSC)和侧向散射光(SSC),同时细胞表面的荧光素被激发发射出荧光。

前向散射光和侧向散射光检测器收集散射光转变为电信号;荧光则被聚光器收集,不同颜色的荧光被双色反光镜转向不同的光电倍增检测器,将荧光信号也转变成电信号。FSC和SSC是流式分析中两个非常基本的参数。

FSC的值能代表细胞的大小,细胞的体积越大则FSC就越大。SSC则代表细胞的颗粒度,细胞内细胞器和颗粒度越大则SSC越大。

检测分析系统:荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原强度或细胞内物质的浓度,光信号转换为可被计算机识别的电信号。计算机把所测量的各种信号进行处理分析。

流式细胞分选是在流式细胞术的基础上进行的。在流动室的喷口上方配有一个超高频的压电晶体,产生的振动使喷出的液流形成均匀的液滴,待测细胞就分散在这些液滴之中。

将这些液滴充以正负不同的电荷(对标有荧光素的细胞液滴带以负电荷;未标记荧光素的细胞液滴带以正电荷;而不含有细胞的液滴则不被带电荷),当液滴流经偏转板时,在高压电场的作用下偏转,落入各自的收集容器中,不带电荷的液滴落入废液容器,从而实现细胞的分离。 第一次回答希望能帮到你,如有理解不当的地方,欢迎指正。

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